紫外可见光度计

紫外分光光度法测定蓝莓中的维生素C含量

发布日期:2020-02-17  点击次数:
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一 实验目的
1掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。
2掌握水果(或蔬菜)中的维生素C含量的测定方法。


二实验原理
紫外分光光度计快速测定法是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性,于波长243nm处测定样品溶液与碱处理样品两者吸光度之差,通过查校准曲线,即可计算品中维生素C的含量。此法操作简单/快速准确/重现性好结果令人满意。特别合适含深色样品的测定。


(三)仪器与试剂
仪器
分析天平,蓝莓若干,研钵,容量瓶(10ml,50ml,100ml),滤纸,漏斗,5ml移液器


试剂
抗坏血酸标准溶液:用分析天平准确称取抗坏血酸10mg,加2ml 1%盐酸,加蒸馏水定容至100ml,混匀。此抗坏血算溶液的浓度为100μg.ml-1


(四)实验步骤


1.标准曲线的绘制
试管标号 1 2 3 4 5 6 7 8
标准VC加入体积/ml 0.1 0.2 0.3 0.4 0 .5 0.6 0.8 1.0
蒸馏水 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.2 9.0
VC溶液浓度/(μg/ml) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0




2样品的测定
1.  样品的提取:将果蔬菜品洗净/擦干/切碎/混匀。称取5.00g于研体中,加入2-5ml1%HCL,匀浆,转移到25ml容量瓶中,稀释至刻度。若提取液澄清透明,则可直接取样测定,若有浑浊现象,可通过离心(10000g,10min)来消除。
2.  样品的测定:取0.1-0.2ml提取液,放入盛有0.2-0.4ml10%盐酸的10ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白,在243nm处测定其消光值。通过查标准曲线,计算出样品的维生素的含量。


(五)计算与数据
                         μXV总


维生素C的含量(μg/g)=            


                         V1XW总


式中:μ——从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量


      (μg)


      V1——测消光值时吸取样品溶液的体积(ml)


      V总——样品定容体积(ml)


      W总——称样重量(g)


数据见excel表


(六)思考与讨论


除了本实验中的方法外,抗坏血酸还有哪些测定方法?


答:一 氧化还原法


1,  直接碘量法


2,  6-二氯酚靛酚滴法


         二/分光光度法


1.  紫外快速测定法


2.  2,4-二硝基苯肼法


3.  高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸


         三,光电比浊法


         四,电化学法


         五,荧光分析法


1.  抗坏铁酸的微量荧光测定法


2.  抗坏铁酸总量的荧光测定法
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